英文名称: SP6 RNA Polymerase
其他名称: SP6核糖核酸聚合酶

级别: BR
分子量: 单体约98kDa
来源: 大肠杆菌细胞, 含有编码相应RNA聚合酶的克隆基因
浓度: 20u/ ul (≥100U/ ul, HC)
活力定义: 是指在37℃, 60分钟内将1nmol AMP合成掺入到寡聚核苷酸片段 (DE-81) 光吸收形式) 所需的酶量
酶活性分析混合物: 40mM Tris-HCL (PH8.0) , 10mM DTT, 6mM MgCL2, 2mM 亚精胺, 0.5mM 各种NTP, 0.6MBq/ ML (3H) .-ATP和20ug/ ml含有相应启动子序列的质粒DNA
保存缓冲: 每种聚合酶保存于50mM Tris-HCL (PH8.0) , 5mM DTT, 0.1mg/ ml BSA, 150mM NaC1, 0.5mM ELUGENT去污剂和50% (V/ V) 甘油
5*转录缓冲液: 200mM Tris-HCL (PH9.025℃) , 30mM MgCL2, 50mM DTT, 50mM NaC1和10mM 亚精胺
抑制剂: 金属螯合剂, 当NaC1或KC1浓度高于150mM (SP6和T7 RNA聚合酶) 时, 酶活性降低超过50%, 硫酸铵可使酶活性降低超过50%
失活: 加入EDTA或者70℃加热10分钟
质量控制: 相关测试表明无内切或外切脱氧核糖核酸酶, 核糖核酸酶污染
功能测试: 体外转录反应
特点: 合成掺入特殊核苷酸, 如氨基-, 生物素-, 荧光素-, 地高辛-标记的核苷酸
性状: 液体, SP6核糖核酸聚合酶是一种依赖DNA的聚合酶, 对SP6启动子序列表现高度专一性. 用该酶合成RNA, 仅能以SP6 DNA或克隆在SP6 启动下游的DNA作为合成模板. 该酶能以32P, 35S及3H标记的核苷三磷酸为底物
用途: 生化研究. 合成标记和未标记的RNA, 用于杂交, 体外RNA翻译; 作为RNA, siRNA, RNase酶切保护分析的底物以及基因组DNA测序的模板; 研究RNA的二级结构和RNA-蛋白质相互作用, RNA剪接; 标记的RNA探针合成, 用于印迹实验, 原位杂交, microarray杂交
保存: -20℃