英文名称: T4 RNA Ligase
分子量: 43.6kDa, 单体

级别: BR
来源: 含有T4噬菌体克隆基因63的大肠杆菌
浓度: 10u/ ul
活性定义: 是指在37℃, 30分钟内将1nmol 5'-[32P]- (A) 12-18转化为磷酸酶抗性形式所需的酶量
酶活性分析混合物: 50mM Tris-HCL (PH7.5) , 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 10uM 5'-[32P]- (A) 12-18 (10uM 5'-末端)
保存液组分: 20mM Tris-HCL (PH7.5) , 50mM KC1, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 0.5mM ELUGENT变性剂和50% (v/ v) 甘油
10*反应缓冲液: 500mM HEPES-NaOH (PH8.025℃) , 100mM MgCL2, 100mM DTT
抑制剂: 金属螯合剂, SH基团修饰试剂
失活: 70℃加热10分钟
质量控制: 测试表明无内切和外切脱氧核糖核酸酶, 核糖核酸酶, 磷酸酶污染
备注: 反应体系中ATP的浓度取决于连接反应的类型, 推荐的BSA反应浓度是0.1mg/ ml
性状: 重组酶, 催化ATP依赖的分子内和分子间磷酸二酯键连接 (5'-磷酸基团和3'-羟基末端) ,底物分子为多聚核苷酸, 寡核苷酸, ssRNA和ssDNA, 分子之间的最小的连接底物是核苷3', 5'-二磷酸, 而分子内连接的最小底物是8个碱基的寡核苷酸. 配套提供反应缓冲液, ATP和BSA溶液. 催化3'→5'磷酸二酯键的形成, 使核苷酸的5'-磷酸末端和5'-羟基末端连接. 作用底物包括单链RNA, DNA及二核苷焦磷酸. 随酶提供10X 反应缓冲液
用途: 生化研究. 连接RNA和RNA ; RNA3'-末端标记胞嘧啶3', 5'-双[a-32P]磷酸; tRNA的特异性修饰; 合成寡核苷酸的环化; 寡聚脱氧核糖核苷酸与单链cDNA连接, 用于5'RACE (快速扩增cDNA末端) 分析
保存: -20°C