英文名称: T4 DNA Ligase
CAS号: 9015-85-4

分子量: 55.3kDa, 单体

级别: BR
来源: 含有T4噬菌体克隆基因30的大肠杆菌
浓度: 5Weiss u/ ul (1000CEU/ ul)
活性定义: 是指在ATP-PPi交换反应中, 37℃, 30分钟内将1nmol [32PPi]转换为Norit可吸收形式所需的酶量 (weiss单位, 1个weiss单位相当于约200个粘性末端连接单位. 1个粘性末端连接单位: 20ul反应体系 (50mM Tris-HCL (PH7.5) , 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ ml BSA, 12uM (300ug/ ml) 的5-DNA末端) 中, 在16℃, 30分钟内连接50%连接HindIII酶切的Lambda DNA 产物所需的酶量)
酶活性分析混合物: 66mM Tris-HCL (PH7.6) , 10mM DTT, 6.6mM MgCL2, 0.066mM ATP, 3.3uM[32PPi]
保存液组分: 20mM Tris-HCL (PH7.5) , 50mM KC1, 1mM DTT, 0.1mM EDTA和50% (v/ v) 甘油
10*T4 DNA Ligase缓冲液 (#B69) : 400mM Tris-HCL, 100mM MgCL2, 100mM DTT, 5mM ATP (PH7.525℃)
抑制剂: 当反应体系中NaC1或KC1的浓度超过200 mM时, 可强烈抑制T4 DNA Ligase活性
失活: 65℃加热10分钟或70℃加热5分钟
注意: T4 DNA Ligase与DNA结合会改变条带的琼脂糖凝胶电泳迁移率, 为避免此现象, 电泳前需处理样本或分子量标准. 样本处理如下: 样本与Fermentas公司6*DNA Loading Dye&SDS溶液 (#R1151) 混合, 75℃加热5分钟或65℃加热10分钟后冰浴保存; 转化时, 连接产物的体积不得超过感受态细胞体积中的10%; 电转化之前, 先用氯仿抽提方法除去连接混合物中的T4 DNA Ligase, 然后经乙醇沉淀纯化抽提产物
质量控制: 测试表明无内切脱氧核糖核酸酶, 核糖核酸酶, 磷酸酶污染. 功能检测: 粘性末端或平末端DNA的连接能力
性状: 液体. 该酶催化双链DNA或RNA中毗邻的5'磷酸基团和3'-羟基末端之间形成磷酸二酯键, 还可以修复双链DNA, RNA或DNA/ RNA复合体中的单链切口, 连接DNA的粘性和平末端, 但该酶对单链核酸无酶活性. 该酶需要辅因子ATP
用途: 生化研究. 粘性末端或平末端双链DNA的连接; 双链寡核苷酸接头与双链DNA连接; 双链DNA, RNA或DNA-RNA复合体中缺口的修复; 连接酶介导的RNA检测; 位点特异性突变; 扩增片段长度多态性
保存: -20°C